四、出现异常扩增曲线分析的可能原因有哪些？

2026-01-19 08:59

实时荧光定量PCR扩增曲线包括基线期，指数扩增期，线性扩增期和扩增平台期，标准的曲线应该呈典型的S型。不规则曲线可以根据曲线的具体情况来分析：
1）曲线呈斜线上升原因：热盖失灵或热盖没盖紧，导致控温不准、液体挥发。解决办法:更换仪器热盖或将热盖盖紧。
2）扩增曲线分成两段（断裂）原因：基线的终点大于Ct值，通常是因为模板DNA浓度偏高，CT值< 15，而基线仍然取3-15，其中包含部分扩增信号，导致曲线被压下去。解决方法：减小基线终点，至Ct值前4个循环，重新分析数据。
3）直线扩增曲线，某些样本出现直线扩增曲线原因：探针部分降解解决办法:建议更换试剂进行测试。
4）曲线平台期下掉原因：盖子没盖紧解决办法:PCR反应管盖子盖上后，检查盖子是否盖紧。