科研服务

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外泌体综合研究方案

相关知识:

外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年,外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。

服务内容:

1)外泌体分离提取,包括血清、细胞培养上清、尿液等

2)外泌体鉴定,包括透射电镜、流式细胞术、Western blot、纳米颗粒示踪等

3)外泌体基因、蛋白检测分析技术(mRNA、miRNA、lncRNA、protein等)

4)细胞功能以及动物实验验证外泌体的功能

5)结合miRNA、lncRNA、功能蛋白等的研究方法检测外泌体的生物学功能以及作用机制

应用范畴:

      外泌体综合研究方案      

方案设计-思路优化-实验协作-定期汇报
 
       维伯鑫生物是一家综合的科研服务机构,可为科研工作者提供基因水平、蛋白质水平、细胞水平、组织病理检测、动物实验等实验平台。公司建立了标准化的实验室,配备了先进的实验仪器,可向广大客户朋友全程开放。同时,我司拥有数十位博士硕士专业技术人才,资深的技术老师确保全程解决方案优化调整及实验质控,专业化的实验人员也保证了实验操作流程的规范性和实验结果的价值。维伯鑫生物近年来主攻miRNA、lncRNA、circRNA、外泌体等研究方向,协作了多项国家自然科学基金重大项目、面上、地区、青年项目及各省市科技项目等,为广大客户朋友提供了优质的综合解决方案,广受好评。
 
   具体课题协作服务包括:                                 
 
    ☞ 实验设计或优化: 您可以提供完整的课题思路交予我们进行评估优化(或简化),或告诉我们您的研究方向和大致期望(影响因子等),我们的技术支持团队会根据您的经费实际及相应要求梳理实验方案;
 
   
 ☞ 实验开展和汇报: 严格根据双方协商确定的实验方案进行实验,我司有完善的实验平台和实验技术人员专业协作;开展过程中,我们将每月定期向您汇报实验的进展,让您随时了解您实验的动态,以便根据实际情况及时调整实验方案;

   
 ☞ 实验报告与交流: 实验结束后,我们将及时整理实验结果,汇成实验报告单,并协助分析原始数据,及时进行配合交流;

    ☞ 写作指导与编译: 我们将针对成稿困难的客户进行专门指导,有需要的可提供翻译、润色等支持,以协助将科研成果更好更快的产出。
 
   外泌体综合研究方案:          


       外泌体Exosome形成是由细胞膜内陷,形成内体,再形成多泡体,最后分泌到胞外。外泌体中携带有母细胞的多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息,而非编码RNA(包括miRNA、lncRNA、circRNA等)在调控基因表达等方面有着重要作用,对外泌体中的miRNA、lncRNA、circRNA进行研究不仅能够深入了解疾病或不同发育阶段的内在机制,而且筛选外泌体特异biomarker也有着非常高的临床应用价值。随着液态活检及体外诊断技术的不断发展,外泌体正在成为最新的疾病诊断标志物。


Exosome biogenesis

Exosome Structure
 

外泌体经典应用案例

外泌体与lncRNA研究案例


     案例:Takahashi KJ, Yan IK, Wood J, et al. Involvement of Extracellular Vesicle Long Noncoding RNA (linc-VLDLR) in Tumor Cell Responses to Chemotherapy. Mol Cancer Res. 2014 ,12(10): 1377–87. 

      研究人员通过对细胞间对话媒介外泌体中的lncRNA进行研究,在肝癌中发现了一个独特的化疗药物应答及耐药性产生的机制。通过外泌体运转Linc-VLDLR到受体肿瘤细胞,使受体肿瘤细胞中Linc-VLDLR升高,进而通过调控下游变化使得机体产生耐药性。

研究思路:

      通过芯片筛选发现lnc-VLDLR在HCC细胞外泌体比HCC细胞更富集。敲降Linc-VLDLR后细胞增殖marker PCNA表达下降,增殖能力下降。化疗药物处理Linc-VLDLR表达变化。加入不同浓度的外泌体,Linc-VLDLR的表达随外泌体浓度增加而升高,敲降细胞中并没有升高。 细胞实验结果与此相符。化疗药物处理后,加入外泌体增加细胞活性,但敲降细胞的活性却没有增加。这说明外泌体能够在化疗药物处理后通过运转Linc-VLDLR调控细胞活性,并且可能是通过ABC转运蛋白家族。

外泌体与circRNA研究案例

      案例:Li Y, Zheng QP, Bao CY, et al. Circular RNA is enriched and stable in exosomes: a promising biomarker for cancer diagnosis. Cell Res. 2015, 25(8):981-4.

       circular RNAs是一类广泛存在的环状闭合的非编码RNA,可在体内调控基因的表达。外泌体是一类由细胞分泌的膜状囊泡结构,其内部含有丰富的物质,包括miRNAs, lncRNA,和circRNAs。外泌体中是否能检测到稳定存在的circRNA,能否作为疾病诊断的biomarker,该研究通过一系列实验进行了探索。证明CircRNAs在外泌体中是表达丰富和稳定的,可以作为肿瘤检测的潜在biomarker。

研究思路:

      该研究首先对肝癌细胞系分离外泌体进行了circRNA检测,表明细胞分泌外泌体中存在着丰富的circRNAs。随后对健康人血清来源外泌体进行了检测,表明血清外泌体中稳定的circRNAs是可能作为诊断biomarker。进一步的小鼠肿瘤模型和临床直肠癌病人样本血清外泌体的circRNAs检测表明,检测血清外泌体中的circRNA作为临床诊断的biomarker是可行的。

 

外泌体与miRNA (miRNA in exosomes)

      案例1:Melo SA, Sugimoto H, O'Connell JT, et al. Cancer Exosomes Perform Cell-Independent MicroRNA Biogenesis and Promote Tumorigenesis. Cancer Cell, 2014.

      这篇文章中研究者采用Affymetrix microRNA 4.0芯片通过比对乳腺癌细胞株及正常细胞株内外泌体中microRNA的种类及含量发现两者的表达谱系差异,并进一步发现外泌体内含有microRNA加工系统,能够将前体microRNA加工为成熟microRNA,继而研究者对外泌体内加工前体microRNA为成熟microRNA的各组分分别进行了研究,证实外泌体内有着成熟microRNA加工这一机制的存在。从癌细胞分泌的外泌体到达远端后可以将其内加工成熟的microRNA释放出来并使正常细胞转化为癌变细胞,这一研究进一步揭示了癌症演变中外泌体的作用并为Dicer成为潜在的肿瘤标志物提供了线索。

 

研究思路:

图:各细胞株分离的外泌体24h和72h时间点的microRNA芯片比较散点图
 
图 外泌体内Dicer表达干扰前后microRNA芯片谱系结果
 
图 癌细胞株来源外泌体内microRNA及其前体表达随时间变化

 


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