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甲基化实验外包,请认准维伯鑫生物科技!

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背景知识:

 

DNA甲基化是最早发现的DNA修饰途径之一,大量研究表明,DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而控制基因表达。DNA甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)和少量的N6-甲基嘌呤(N6-mA)及7-甲基鸟嘌呤(7-mG)。结构基因含有很多CpG结构,2CpG2GpC中两个胞嘧啶的5位碳原子通常被甲基化,且两个甲基集团在DNA双链大沟中呈特定三维结构。基因组中60% 90%CpG都被甲基化,未甲基化的CpG成簇地组成CpG岛,位于结构基因启动子的核心序列和转录起始点。DNA的甲基化修饰是基因表达调控的一种重要手段。

 

 

 

主要检测方法及原理:

 

亚硫酸氢钠测序法   Bisulfite Genomic Sequencing PCRBSP

 

亚硫酸氢钠测序法是建立在MSP基础上进一步深入研究CpG岛各个位点甲基化情况的方法。重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,行PCR扩增(引物设计时尽量避免有CpG,以免受甲基化因素的影响)所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。最后,对PCR产物进行测序,并且与未经处理的序列比较,判断是否CpG位点发生甲基化。

 

BSP检测流程图

 

技术优势:此方法一种可靠性及精确度很高的方法,能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态。在寻找有意义的关键性CpG位点上,有其他方法无法比拟的优点。限制性:每次至多能够检测450 bp内的基因甲基化状态。

 

甲基化特异性的PCR     Methylation Specific PCRMSP

 

甲基化特异性是一种特异位点甲基化检测技术。其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因组DNA,未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。因此从理论上讲,用不同的引物做PCR,即可检测出这种差异,从而确定基因有无CpG岛甲基化。

 

MSP检测流程图

 

MSP检测结果

 

    技术优势:这是检测基因甲基化的经典方法,是一种简便的、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方法。可以用于高通量样品基因特异位点甲基化的检测。限制性:因采用甲基化特异性引物进行PCR,该方法一次只能检测一个位点。

 

样品准备条件:

细胞样品:收集细胞后放入液氮中速冻保存或速冻24 h后转入-80 °C冰箱保存。

组织样品:动物组织一般取材后立即放入液氮中速冻保存,液氮冻存24 h后可转入-80 °C冰箱保存。特殊组织(植物等)建议直接进行甲基化检测实验。

所有样品的处理和保存过程中,切忌反复冻融。

   样品运输条件:样品运输条件根据实验样品的处理条件,可以选择液氮或者干冰运输。

 

您只需提供:

 

新鲜且足量的样品(组织不少于50 mg,细胞不少于107,全血不少于500 μl),或纯化好的符合实验要求的DNA≥ 5 μg/样),检测的基因信息,相关文献等。

 

我们提供:

 

实验报告单,MSP电泳图/BSP测序图等。

 

关于维伯鑫

 

维伯鑫生物依靠自身完善的实验平台和专业的实验技术团队,多年来用心深耕科研协作市场,积累了丰富的课题实验经验,有效的帮助科研工作者缩短试验周期、节省实验成本,市场口碑极佳。我们承诺为客户提供规范、周到的实验技术服务,尊重客观事实,保证提供的实验数据真实性与可溯源性。我司拥有数十位博士硕士专业人才,确保全程解决方案优化调整及实验质控,专业化的实验人员为实验操作流程的规范性和实验结果的准确性提供保证。协助了数百项国家自然科学基金重大项目、面上、地区、青年项目及各省科技项目等,为广大客户提供了优质的综合解决方案


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